高效液相色譜儀的衍生化技術(shù)

　　高效液相色譜儀(HPLC)衍生化技術(shù)是指普通檢測方法不能直接檢測或檢測低靈敏度物質(zhì)，并與某些試劑(即衍生試劑)反應(yīng)，使其形成易于檢測的化合物的過程。根據(jù)派生方法，可分為柱前派生和柱后派生。

　　一、柱前衍生化：

　　柱前衍生化是指將被測物體轉(zhuǎn)換為可驗證的導(dǎo)數(shù)，然后用色譜柱分離。

　　這種衍生化可以在線衍生化，即被測物和衍生試劑通過兩個輸液泵被泵入混合器，立即混合反應(yīng)，然后進(jìn)入色譜柱;被測物和衍生試劑可以先反應(yīng)，然后作為一種樣品注入?；蛄鲃酉嗫杉尤胙苌噭?，取樣后，供試品及流動。相位是直接推導(dǎo)出來的。

高效液相色譜儀的衍生化技術(shù)

　　二、柱后衍生化：

　　柱后衍生指的是被測物的分離，然后將色譜柱上的溶液與衍生試劑在線混合，形成可驗證的導(dǎo)數(shù)，然后引入檢測器。根據(jù)衍生物的種類，可分為紫外-可見衍生物、熒光衍生物、拉曼衍生物和電化學(xué)衍生物。

　　1、紫外可光見衍生化：

　　主要研究結(jié)果如下：(1)UV衍生物是指有機(jī)化合物與具有紫外吸收基團(tuán)的衍生試劑發(fā)生弱或無紫外吸收的反應(yīng)，形成能被UV檢測到的化合物。例如，胺很容易與鹵代烴、羰基和酰基衍生物反應(yīng)。

　　(2)可見光衍生物有兩個主要用途：一是利用過渡金屬離子檢測過渡金屬離子，過渡金屬離子與著色劑反應(yīng)生成有色配合物。用可見光探測螯合物或離子締合物。第二，用于有機(jī)離子的檢測。在流動相中加入被測離子的反離子后，形成有色離子對化合物，并對其進(jìn)行分離和檢測。

　　2、熒光衍生化：

　　熒光衍生化是指檢測受試物與熒光衍生化試劑反應(yīng)產(chǎn)生的熒光物質(zhì)。

　　一些熒光衍生試劑本身沒有熒光，但它們的衍生物有很強(qiáng)的熒光。

　　衍生化技術(shù)不僅使高效液相色譜儀分析系統(tǒng)復(fù)雜化，而且耗費(fèi)時間，增加了分析成本。一些衍生反應(yīng)也需要嚴(yán)格控制反應(yīng)條件。因此，只有在找不到一種簡便、靈敏的檢測方法或為了提高分離和檢測的選擇性時，才考慮衍生化技術(shù)。