柱后衍生-熒光檢測法測定黃曲霉毒素

　　黃曲霉毒素是黃曲霉在生長繁殖過程中產生的一組有毒代謝產物，黃曲霉毒素主要污染糧食和油料作物，如花生、玉米、大米、棉籽等。黃曲霉毒素對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。因此國際上對食品中黃曲霉毒素有嚴格的限量要求。

　　本文采用高效液相熒光檢測器—柱后衍生法對黃曲霉毒素進行測定，通過色譜柱的選擇，流動相配比的優化以及檢測器條件的調整等手段，以期得到黃曲霉毒素的分離效果。

　　一、實驗方法

　　Cometro高效液相色譜系統;

　　熒光檢測器，激發波長360nm，發射波長450nm;

　　Cometro柱后衍生系統，柱后衍生70度，衍生劑：碘的0.03%甲醇水溶液，流速0.3ml/min;

　　流動相：甲醇-乙腈-水;

　　流速：0.8ml/min;

　　色譜柱：多種品牌的十八烷基鍵合硅膠柱;

　　樣品：黃曲霉毒素儲備液;

　　二、結果與分析

　　1、色譜柱的選型

　　采用四種不同品牌的C18色譜柱，分別標記為進口柱1、進口柱2、進口柱3、Comatex柱。流動相比例為甲醇-乙腈-水=40:18:42，進樣量為10μl，比較其分離效果。

　　由實驗結果可以看出，四種不同填料的色譜柱中，Comatex柱的分離效果，但仍然不能得到一個良好的分離度，因此，通過改變流動相的比例來進一步改善分離效果。

　　2、流動相配比的優化

　　通過上述實驗，選擇分離效果的Comatex柱，調節流動相的比例為甲醇-乙腈-水=40:10:50，其他實驗條件不變。

　　在該條件下，可以得到一個較好的分離效果。

　　3、檢測器條件的調整

　　將工作液稀釋25倍后，進樣量分別為5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，測定樣品的標準曲線。

　　噪音大靈敏度低，信噪比、分離度差。

　　優化調整檢測器條件，使用Comatex C18色譜柱，優化流動相，重復上述實驗。

　　上述結果顯示，基線噪音(0.2mv)，靈敏度，信噪比(>10)，柱效(>9000)，主峰之間的分離度(>1.5)。

　　三、結論

　　通過色譜柱的選擇，流動相配比的優化，以及燈的能量的調節，可以提高分離度，降低噪音，提高靈敏度，得到良好的分離效果。采用高效液相熒光檢測器-柱后衍生法測定黃曲霉毒素，選用Comatex色譜柱;流動相為甲醇-乙腈-水=40:10:50;優化檢測器條件，可以得到分離效果。